組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
小鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1（BACE1）elisa試劑盒Anti-KNDC1研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 細胞膜受體 細胞膜蛋白

兔多肽YY（PYY）elisa試劑盒Anti-KCNG4/KV6.3研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 細胞凋亡 激酶和磷酸酶 線粒體 泛素

豚鼠單核細胞趨化蛋白1（MCP-1/CCL2/MCAF）elisa試劑盒Anti-KY/Kyphoscoliosis peptidase研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 細胞凋亡 激酶和磷酸酶 線粒體 泛素

人程序性細胞死亡因子4（PDCD4）elisa試劑盒Anti-KLLN研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 細胞凋亡

大鼠成纖維細胞生長因子13（FGF-13）elisa試劑盒Anti-KCTD18研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

小鼠內(nèi)皮祖細胞報價Anti-Ketohexokinase研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 細胞類型標志物 細胞骨架

大鼠支氣管成纖維細胞*培養(yǎng)基報價Anti-KLRF1/NKp80研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

小鼠 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 （His 標簽）現(xiàn)貨供應Anti-KRG2/DDX11研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

氟苯尼考保存Anti-KMT3B/NSD1/ARA267研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

含青霉素價格Anti-KIF11/Eg5/TRIP5研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 新陳代謝

5-尿苷一磷酸價格Anti-KAT13A/SRC1研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 新陳代謝

α-甘油磷酸二鈉保存Anti-Keratan Sulfate研究領(lǐng)域  心血管 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 新陳代謝

豚鼠腎素（Renin）elisa試劑盒Anti-Lysyl tRNA synthetase研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 新陳代謝

魚11-酮類固醇elisa試劑盒Anti-KDM5B/PLU1/Jarid1B研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 細胞骨架

羊環(huán)磷酸腺苷（cAMP）elisa試劑盒Anti-KIST/UHMK1研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 新陳代謝 表觀遺傳學

異葒草苷Measles virus of fusion protein  麻疹病毒抗原（麻疹病毒融合蛋白）TXNRD1  硫氧環(huán)蛋白還原酶1抗體

紫云英苷FSH-R(Follicle-stimulating hormone receptor precursor)  促卵泡刺激素受體抗原TXNIP  硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2抗體

對葉百部堿FSH(Follicle-stimulating hormone precursor)  促卵泡刺激素抗原TXNDC9  胚胎干細胞相關(guān)蛋白TXNDC9抗體

仙茅苷GABRA1(gamma-amibutyric acid (GABA) A receptor, alpha 1)  γ1氨基丁酸A型受體α1抗原TXNDC5  硫氧還蛋白5抗體

R型人參皂苷Rh2GABAB1(GABAb Receptor 1)  g-氨基丁酸B1受體(多肽)TXNDC4/ERP44  內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白44抗體

白花前胡甲素GABABR2/GB2(GABA B Receptor 2)  γ1氨基丁酸A型受體B2抗原TXA2R  血栓素A2受體抗體

白花前胡乙素GAD-67 (glutamate decarboxylase 67)  谷氨酸脫羧酶-67抗原Twist2  TWIST蛋白2抗體抗體

貝母辛GADD153(Growth arrest and DNA damage-inducible 153)  生長抑制DNA損傷基因153抗原TWIST protein  TWIST蛋白抗體

地奧司明phospho GAP-43(pSer41)(phospho Growth associated protein 43 )  磷酸化神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43抗原TWA1/C20orf11  20號染色體開放閱讀框11抗體

香蒲新苷GAPDH  3-磷酸甘油醛脫氫酶(人)抗原TUSC5  抑癌基因5抗體
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