注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
L-脯氨醇使用說明書Anti-CLEC11A Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長因子和激素 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物

BOC-D-天冬酰胺實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CLDN8 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞凋亡

BOC-L-絲氨酸使用說明書Anti-CLEC3B Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

L-叔亮氨酸保存Anti-CLIC3 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 激酶和磷酸酶

聚苯乙烯樹脂使用說明書Anti-CLEC4M Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白

SDS-PAGE蛋白質(zhì)中分子量保存Anti-CLEC4A Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

丁基瓊脂糖凝膠4B使用說明書Anti-CLIP2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 干細(xì)胞 細(xì)胞表面分子

纖維素透析袋實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CLIC6 Antibody蛋白分子量  predicted molecular weight: 40kDa

三道定時(shí)鐘價(jià)格Anti-CLIP3 Antibody蛋白分子量  predicted molecular weight: 80kDa

硅膠HF254價(jià)格Anti-CLK2 Antibody蛋白分子量  predicted molecular weight: 43kDa

甲砜霉素保存Anti-CLIP4 Antibody蛋白分子量  predicted molecular weight: 41kDa

鏈霉蛋白酶價(jià)格Anti-CLK1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

腺苷脫氨酶使用說明書Anti-CLK4 Antibody蛋白分子量  predicted molecular weight: 67kDa

溶壁微球菌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CLN5 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡

變旋酶使用說明書Anti-CLN5 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 干細(xì)胞 細(xì)胞類型標(biāo)志物 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物

2-甲氧基-4-(*基)苯基硼酸  (R)-3-叔丁氧羰基基吡咯烷  1,8-二溴芘

*磺酸鐵(III)  (S)-(-)-1,2,3,4-四氫-1-  1,6-二溴芘

4-甲硫基乙酯  R-四氫  9,9-二甲基芴

2,3-二-4-乙氧基苯硼酸  L-(-)-二對(duì)甲氧基苯甲酰  9,9-二甲基-2-溴芴

2-Bromoanisole  2-溴苯甲醚  578-57-4

TERT-AMYL M  甲基叔戊基醚  994-05-8

1,3-Dimethoxybenzene  間苯二甲醚  151-10-0

15-Crown-5  15-冠醚-5  33100-27-5

大鼠整合素α2(ITGA2)ELISA試劑盒 ，英文名： ITGA2 ELISA Kit

人抗線粒體抗體(AMA)ELISA檢測試劑盒HumanAi-mitochondriaaoaibodies,AMAELISAKit 96T/48T

大鼠白介素9(IL-9)免疫試劑盒 Rat Ierleukin 9,IL-9 ELISA KIT

CLIAKitfogtp(Huma-cellspecificGTPase)ELISAKit人T細(xì)胞特異性鳥苷三磷酸酶規(guī)格：48T/96T

全組織酸性磷酸酶活性染色試劑盒10次

ELISAKitALG人抗淋巴細(xì)胞球蛋白規(guī)格：48T/96T
腦胞內(nèi)原蟲屬通用·PCR檢測試劑盒說明書人重去甲腎上腺素(NE-B)ELISA試劑盒英文名稱：Human radrenaline Bitartas,NE-B ELISA Kit*

兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit Neuron-specific elase,NSE ELISA Kit進(jìn)口/分裝

兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit neurotrophin 3,NT-3 ELISA Kit *

兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit neurotrophin 4,NT-4 ELISA Kit *

兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit*

兔子生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit 進(jìn)口/分裝

兔子視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Retil binding protein 4,RBP-4 ELISA Kit *
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。